Diabetologia：激活但功能受损的遗忘Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失口内自身突变到消失1M-哮喘临床呕吐的十分困难率在成人末期就有很好的阐述，多个口内自身突变乙型肝炎的成人里面有70%在血清切换后10在短期内患上哮喘，而随访15年的成人这一分之一减低到84%。比起之下，占临床1M-哮喘一半以上的M-1M-哮喘的复发机制还并未得不到充分的深入研究。

愈发多的人开始用到分期系统来定义1M-哮喘的十分困难：个棒状在消失多种口内自身突变时转入第1先决条件，消失血糖异常时转入第2先决条件，消失呕吐时转入第3先决条件。一些多发口内自身突变乙型肝炎的个棒状，在1期和2期，十分困难较慢，并转型为复发的1M-哮喘。我们早先阐述了一组成员在首次检验到多种口内自身突变结果显示后将近10年无哮喘的近于慢十分困难者，这组成员病患者人数少，但特征近于为明确。随后，我们发现口内自身复合物特异性CD8+T细胞内反应将在十分困难减慢的病患者里面基本不存在，但在近期复发和长期存在的哮喘病患者里面很容易检验到。这或许指出，与十分困难病患者比起，这些病患者胃溃疡反应将的减缓增强。

现代深入研究指出，尽管减缓性T细胞内(Treg)生产量情况下，但哮喘病患者存在一些功能不足之处，其里面还包括对IL-2的反应将技能增大。此外，哮喘病患者里面的effectCD4+T细胞内或许对减缓不具抵抗性，表现为effectT细胞内的减缓移向，自然导致的Treg和棒状外导致的抑制Treg，以及复合物经历的CD4+T细胞内里面IL-2反应将移向。本深入研究的目的是阐述了CD4+减缓性T细胞内(Treg)在一小群近于减慢十分困难者里面的特征，他们的平均年长为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以人群为基础的纵向深入研究，在21岁表列确诊的病患者亲属里面安全检查1M-哮喘的致命因素。我们早先阐述了长期减慢十分困难者的特征，他们始终保持多重口内自身突变乙型肝炎超过10年，但并未消失哮喘的临床呕吐，慢性或非开展性胃溃疡。随后，10名继续始终保持无哮喘并愿意提供大量棒状内结果显示的减慢十分困难者扩及T和B细胞内功能统计分析。在目前的深入研究里面，8名慢十分困难者(SP组成员)，里面位年长43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的口内自身突变乙型肝炎。所有的大多数人都西北面1M-哮喘十分困难的1期，尽管一些人随后失去了口内自身突变对某些复合物的乙型肝炎反应将，然而，一名病患者仍未西北面2期将近6年，但并未消失临床呕吐，一名病患者被检验为哮喘，该受试者72岁，在采集实验结果显示时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在统计统计分析里面对该小分子开展了单独指标。分开外周血单个氢细胞内(PBMCs)，引入多参数流式细胞内法术和T细胞内减缓测试指标小分子里面Treg的振幅、表现M-和功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)开展无全权负责聚类统计分析，指标Treg表现M-。

结果：与心理健康小分子比起，来自慢十分困难棒状的无意识CD4+T细胞内的全权负责聚类显示，酪氨酸的无意识CD4+ Treg振幅减低，与糖皮质激素抑制的TNFR涉及蛋白(GITR)解读减低有关。一名HbA1c增高的病患者与十分困难减慢者和意味着的比起较组成员比起，Treg曲谱有所不同。功能统计分析指出，与心理健康小分子比起，来自减慢十分困难棒状的Treg介导的CD4+effectT细胞内减缓凸显受损。表现为对effectCD4+T细胞内CD25和CD134解读的减缓减低。

三幅1 深入的表现M-统计分析显示，CD4+Treg亚M-在慢十分困难配置文件里面减低。由FlowSOM生成的Treg四楼，涌进在来自所有小分子的已逝CD4+CD45RA -细胞内上。根据标明物解读鉴定出10个元簇:无意识T细胞内_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞内;HLA-DR + GITR +无意识T细胞内;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用到9个不同Treg标明生成的10个元簇的MST。每个结点值得一提的是一个坦克部队(100个坦克部队)，较大的元坦克部队(10个元坦克部队)在结点组成员周围上色。每个结点里面的饼三幅表示单个标明的解读档次。(b)每个元聚类的热三幅，以显示总棒状标明解读。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)生成三幅，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说重元素为每个metacluster盒三幅表(重元素> 0.05%)确定为HD和SP组成员:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞内(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞内(l)。白色左上方值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用到CITRUS的预测模M-证实，Treg振幅的减低是十分困难减慢的字样。分级门控(a - f)和玉米统计分析(g-k)比较SP大多数人和意味着的HD大多数人在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的值得一提的是性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR解读开展分开，精心设计FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(星点)组成员以及小分子SP 606(白色)里面CD25+ cd127的振幅简介三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的盒三幅表;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读高强度后处理，箭头凸显的簇被鉴别为SP和HD配置文件间的不同。(j)盒三幅表显示了在SP(星点)和HD(灰点)组成员里面，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对来说重元素(分之一)。(k)直方三幅显示每个簇的表现M-(粉红色)和Treg标明相对来说解读与历史背景解读(白色);上列，寄存器Treg_3;下面偷偷地，寄存器Treg_4。历史背景与所有其他簇里面标明的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与心理健康献血者比起，十分困难减慢者无意识treg的GITR减低。每个无意识CD4+T细胞内元簇(无意识T细胞内_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞内;HLA-DR + GITR +无意识T细胞内;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个解读标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的解读热三幅(sp606不还包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇里面所有HD(黄褐色)、所有SP(白色)和SP 606(白色)的FlowSOM GITR解读联接，显示直方三幅(c)和简介三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(白色)所有小分子还包括，p< 0.05(白色)小分子SP 606和意味着的HD不还包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR解读，从分级门控，从所有HD(黄褐色)、所有SP(白色)和SP 606(白色)联接，显示直方三幅(e)和简介三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自减慢十分困难的CD4+ treg细胞内依靠effectCD4+T细胞内的技能增大。SP组成员用白色的新线和左上方表示，HD组成员用黄褐色的新线和左上方表示，白色的新线/左上方表示小分子sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内开展分选。CD4+CD25−(；也者)被标明为CFSE, Treg按辨别的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化细胞内，人才3翌日开展流式细胞内法术检验。(a-d)与CD4+；也者相对来说应将的treg人才(暂时性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者人才。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE减缓多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓多于。用到乙型肝炎比起较(酪氨酸的响应将细胞内不含treg)推算减缓多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 effectCD4+T细胞内对减慢十分困难的T细胞内已逝化的减缓近于为敏感。SP组成员用白色的新线和左上方表示，HD组成员用黄褐色的新线和左上方表示，白色的新线/左上方表示小分子sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内开展分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标明，treg按辨别的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化细胞内，人才3翌日开展流式细胞内法术(CD25反染)和细胞内因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者协力人才。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE减缓百分率(b)。(c,d) CD25减缓百分率(c)和CD134减缓百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才里面的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自减慢十分困难子的已逝化无意识CD4+Treg在GITR解读里面得不到了延展和丰富，忽视了再进一步深入研究Treg在1M-哮喘风险个棒状里面的异质性的实质。

注解来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28